Nachdem der Papst verstorben ist und im Vatikan beerdigt wird geling es Vittoria Vetra (Ayelet Zurer), einer Physikerin am CERN Institut, zum ersten Mal eine dauerhafte Antimaterie, die eine extrem zerstörerische Sprengkraft aufweist, zu erschaffen. Diese wird aber kurz darauf aus dem Institut entwendet. Währenddessen werden die vier favorisierten Kardinäle, der bevorstehenden Papstwahl, von den Illuminati entführt. Daraufhin wird der Symbologe Robert Langdon (Tom Hanks) von einem Vertreter des Vatikans über die Geschehnisse in Kenntnis gesetzt. Beide reisen nach Rom um den Vatikan zu retten.
Im Geheimarchiv des Vatikans stoßen sie auf eine geheime englische Botschaft die auf den “Pfad der Erleuchtung hinweist” und am geheimen Treffpunkt der Illuminati enden soll. Auf diesem Pfad befinden sich ebenfalls die “Altäre der Wissenschaft” auf denen jede Stunde einer der entführten Kardinäle den Tod finden und mit einem der vier Elemente (Erde, Luft, Feuer und Wasser) gekennzeichnet werden soll. Es beginnt ein Wettlauf mit der Zeit um die Kardinäle zu retten.
Kurz darauf wird Langdon klar wo sich der Antimateriebehälter befindet und versucht ihn auszutauschen.